基本信息
啟動(dòng)子:araBAD
復(fù)制子:pSC101
終止子:λ tL3 terminator
原核抗性:Amp
克隆菌株:DH5a
培養(yǎng)條件:30度
表達(dá)宿主:大腸桿菌
誘導(dǎo)方式:阿拉伯糖
載體宿主：大腸桿菌
載體用途：基因敲除
基因類型：Red
原核抗性：Amp
質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pKD46質(zhì)粒是目前應(yīng)用最廣泛的Red同源重組質(zhì)粒，該質(zhì)粒含有受阿拉伯糖啟動(dòng)子調(diào)控的exo、bet、gam基因，其復(fù)制子為低拷貝溫敏型復(fù)制子，便于質(zhì)粒的消除。
與同源重組基因敲除相關(guān)的3個(gè)酶：
1、Exo蛋白：Exo蛋白是一種核酸外切酶，單亞基的分子量為24 kD，Exo蛋白的活性形式是一種環(huán)狀三聚物分子，中間有一中空的通道，通道的一端可容納雙鏈DNA分子，另一端只可容納單鏈DNA。Exo蛋白可結(jié)合在雙鏈DNA的末端，從DNA雙鏈的5’端向3’端降解DNA，使DNA分子形成3’粘性末端。
2、Beta蛋白：Beta蛋白在Red同源重組中起著決定性作用，具有介導(dǎo)互補(bǔ)單鏈DNA退火的功能，是一種退火蛋白，單亞基的分子量為25.8 kD。在溶液中，Beta蛋白自發(fā)地形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，緊緊地結(jié)合在單鏈DNA的3’突出端，防止DNA被單鏈核酸酶降解，并介導(dǎo)互補(bǔ)單鏈DNA的退火。雙鏈DNA退火完成后，Beta蛋白從DNA雙鏈上解離下來(lái)。
3、Gam蛋白：Gam蛋白為16kD的多肽分子，可與RecBCD核酸外切酶結(jié)合，抑制其對(duì)外源DNA的降解作用，防止外源DNA 進(jìn)入細(xì)胞后被宿主降解。
