基本信息
啟動(dòng)子:CMV
復(fù)制子:pUC
克隆菌株:DH5a
培養(yǎng)條件:37度
5'測(cè)序引物:CMV-F
質(zhì)粒屬性
載體宿主：哺乳細(xì)胞
基因種屬：空載體
基因類型：ORF
原核抗性：Amp
質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pCMV6-AC-FC-S，如需質(zhì)粒圖譜序列，請(qǐng)向客服索取
親愛(ài)的科研工作者，感謝您信任雅吉生物，我們致力于為大家分享質(zhì)優(yōu)價(jià)適的質(zhì)粒，受各種因素影響，我們只保證質(zhì)粒的關(guān)鍵序列測(cè)序正確，不能保證實(shí)驗(yàn)效果。請(qǐng)您收到質(zhì)粒后請(qǐng)務(wù)必先轉(zhuǎn)化，再挑取單菌落擴(kuò)增，不要直接使用。如果您需要即用的大包裝質(zhì)粒或病毒顆粒，可委托我們制備，性價(jià)比更高。
一、擴(kuò)增流程
收到產(chǎn)品后，請(qǐng)先根據(jù)產(chǎn)品管壁標(biāo)簽來(lái)判斷產(chǎn)品形式，并在擴(kuò)增前準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒菌株的抗性、感受態(tài)和培養(yǎng)溫度。
1、質(zhì)粒干粉（常溫運(yùn)輸，存于-20度，90天保質(zhì)期，請(qǐng)務(wù)必轉(zhuǎn)化挑單克隆培養(yǎng)，不要直接使用和測(cè)序）
①收到質(zhì)粒干粉后請(qǐng)先5000rpm離心1min，再加入20μl ddH2O去離子水溶解質(zhì)粒；
②取1支100μl 感受態(tài)于冰上解凍10min，加入2μl質(zhì)粒，再冰浴30min后，42℃熱激60s，不要攪動(dòng)，再冰浴2min；（從第二步開(kāi)始均要在超凈工作臺(tái)中無(wú)菌操作）
③加入900μl無(wú)抗的LB液體培養(yǎng)基，180rpm震蕩37℃培養(yǎng)45min；
④6000rpm離心5min，僅留100μl上清液重懸細(xì)菌沉淀，并涂布至目標(biāo)質(zhì)�？剐缘腖B平板上；（可使用本平臺(tái)的平板涂布專用玻璃珠進(jìn)行涂布，可以比傳統(tǒng)涂布方法獲得更多轉(zhuǎn)化子）
⑤將平板正向培養(yǎng)1h，再倒置37℃培養(yǎng)14h。如果要求是30度則培養(yǎng)20h；
（菌落過(guò)多則將質(zhì)粒稀釋后再轉(zhuǎn)化。沒(méi)有菌落則加入10μl質(zhì)粒轉(zhuǎn)化。另不要直接轉(zhuǎn)表達(dá)感受態(tài)，要先轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)，重提質(zhì)粒后再導(dǎo)入表達(dá)感受態(tài)）
⑥挑取單菌落至LB液體培養(yǎng)基中，加入對(duì)應(yīng)抗生素，220rpm震蕩培養(yǎng)14h，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和質(zhì)粒提取試劑盒說(shuō)明書提取質(zhì)粒。
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