BL21 感受態(tài)細胞
BL21 Chemically Competent Cell
保存條件: -80℃
產(chǎn)品規(guī)格:
BL21
10×100μl
pUC19(control vector)
10pg/μl;10μl
E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS)
BL21 是最早開發(fā)的用于原核表達的菌株,BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核
表達菌株均來源于 BL21 菌株。該菌株主要用于非毒性蛋白的表達,不含 T7 RNA 聚合酶,所以不能用
于由 T7 啟動子驅(qū)動的蛋白表達(如:pET 系列);但含有大腸桿菌 RNA 聚合酶,可以用于 tac 或 trc 等
使用大腸桿菌 RNA 聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(如:pGEX,pMAL 質(zhì)粒)。 BL21 感受態(tài)細胞由特殊工
藝制作,經(jīng) pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達 107cfu/μg。
1. 取 100μl 冰上融化的 BL21 感受態(tài)細胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置 25 分鐘。
2. 42℃水浴熱激 90 秒,迅速放回冰上并靜置 2 分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入 700μl 不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT 或 LB),混勻后 37℃,200rpm 復(fù)蘇 60 分
鐘。
4. 5000rpm 離心一分鐘收菌,留取 100μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的 2YT
基 因 型
簡 要 說 明
操 作 說 明或 LB 培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
1. 感受態(tài)細胞最好在冰上融化。
2. 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
4. 誘導(dǎo)時,IPTG 濃度可選(0.1-2mM 均可)。
5. 為獲得需要量的蛋白,最佳誘導(dǎo)時間,溫度,IPTG 濃度需實驗者優(yōu)化。
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