| CCK-8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)的試劑，因其操作簡(jiǎn)單快速、高靈敏度且細(xì)胞毒性低等成為替代MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)密度的最好方法。該試劑盒利用水溶性四唑鹽-WST?-8在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料，生成的甲臜量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。 | ||
優(yōu)勢(shì) | ||
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應(yīng)用 | ||
| 細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、藥物篩選、腫瘤藥敏試驗(yàn) | ||
儲(chǔ)存 | ||
| -20℃避光可保存2年，融化后 4℃避光放置可保存 1 年。反復(fù)凍融會(huì)增加背景值。 | ||
注意事項(xiàng) | ||
| 1. 接種時(shí)注意細(xì)胞懸液一定要混勻，以避免細(xì)胞沉淀下來(lái)，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不等，可以每接種幾個(gè)孔就混勻一下。培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)基容易揮發(fā)，為了減少誤差，建議培養(yǎng)板的四邊每孔只加培養(yǎng)基或PBS，而不作為指標(biāo)檢測(cè)孔。 2. 本試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)法去除。 3. 用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒(méi)有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定。 4. 培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少而異。一般情況下，白細(xì)胞較難染色，因此需要較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間或增加細(xì)胞數(shù)量 (～105個(gè)細(xì)胞/孔)。懸浮細(xì)胞與貼壁細(xì)胞相比較難染色。對(duì)于懸浮細(xì)胞，在培養(yǎng)1- 4小時(shí)后，可先從培養(yǎng)箱中取出，目察染色程度或用酶標(biāo)儀測(cè)定決定。若染色困難，可將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時(shí)后再確定。 染色的最佳時(shí)間可定為懸浮細(xì)胞的最佳培養(yǎng)時(shí)間。對(duì)于貼壁細(xì)胞，培養(yǎng)時(shí)間一般為1-4小時(shí)，但在培養(yǎng)30分鐘左右即可取出肉眼觀察染色程度 (根據(jù)細(xì)胞種類而定，需要摸索一下條件)。 5. 若細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化或 pH發(fā)生變化，建議更換新鮮的培養(yǎng)基后再加CCK-8試劑。 | ||
引用文獻(xiàn) | ||
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