蝦堿性磷酸酶(Shrimp Alkaline Phosphatase,SAP)催化DNA和RNA 的5’和3’磷酸單脂的去磷酸化反應(yīng),也可水解核糖和脫氧核糖核苷三磷酸(NTP 和 dNTP)。該酶在分子生物學(xué)研究中應(yīng)用廣泛,如去除DNA和RNA 末端的磷酸基團(tuán),用于后續(xù)的克隆和探針末端標(biāo)記。在克隆中,載體經(jīng)蝦堿性磷酸酶去磷酸化后5’ 端無磷酸基團(tuán),因而不可以和自身3’ 端連接。蝦堿性磷酸酶可作用于5’突出端、凹陷端和平末端,也可用來降解PCR反應(yīng)中的游離dNTP,用于制備測序模板和SNP分析。該蝦堿性磷酸酶在65℃溫育5分鐘即可完全的、不可逆的失活,因此,在連接或末端標(biāo)記之后,可以不用去除;谝陨咸匦,該酶是傳統(tǒng)去磷酸化酶--小牛腸堿性磷酸酶的絕佳替代物。 | ||||||||
組分 | ||||||||
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應(yīng)用 | ||||||||
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活性定義 | ||||||||
1單位指在25℃條件下,30分鐘能使1μg經(jīng) HindIII(產(chǎn)生5’突出末端)消化的 pUC19 DNA 去磷酸化所需的酶量。去磷酸化標(biāo)準(zhǔn)是指在自連接反應(yīng)中能抑制>95%的DNA 再連接。 | ||||||||
儲存 | ||||||||
-20℃可保存3年。 | ||||||||
使用注意事項 | ||||||||
(1)1×SAP Buffer:50 mM Bis-Tris HCl pH 6.0,1mM MgCl2,0.1 mM ZnCl2,25℃ 溫育。 (2)熱失活:65℃ 加熱 5 分鐘,不可逆失活。該酶通常用于酶切載體的去磷酸化,因其不可逆熱失活特性。當(dāng)完成去磷酸化反應(yīng)后,無需再純化產(chǎn)物,可以直接用于后續(xù)連接反應(yīng)。 (3)蝦堿性磷酸酶也可以用來降解PCR反應(yīng)中的游離dNTP,用于制備測序模板和 SNP 分析。同樣無需純化,可直接用于下游實驗。 |
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