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2×RAPA HiFi PCR Mix

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RAPA HiFi DNA 聚合酶,其來源于高保真 DNA 聚合 酶, 并加入了增強的延伸結(jié)構(gòu), 使其具有超保真性能(~280  Taq)、長片段擴增能力、高產(chǎn)量。長片段擴增能力, 使用 該酶可輕松擴增 8kb 的基因組 DNA 、20kb  λDNA、8kb cDNA。該酶具有 6kb/min 以上的延伸速度。該 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、強 3’-5’的外切酶活性, 產(chǎn)物為平末 。

 

裝:


1ml

1 ml×10

 

特點和用

(1)  超保真擴增: ~280 Taq 的保真性能, 是載體構(gòu)建、點 突變、 NGS 模板擴增、基因合成的最佳用酶。

(2)  快速擴增: 具有 6kb/min 擴增能力。

(3)  長片段擴增: 質(zhì)粒、λ DNA  等簡單模板可以有效擴 >20  kb,基因組可以有效擴增>8  kb ,cDNA 可以有效擴 >8kb。

 

存: 長期儲存置于-20°C 以下,可保存 2 年;短期使用置  C  (3 個月)保存。

 

 

使用方

1.  按下表配制反應(yīng)體系并混合均勻:

RAPA HiFi PCR Mix                           12.5 μl

游引物(10 μM)

1 μl

引物(10 μM)

1 μl

模板 DNA

1-250 ng

ddH2O

up to 25 μl

*模板 DNA 用量參數(shù)(25 μl 反應(yīng)體系)

5-250 ng Genomic DNA

 DNA

(目的片段20kb)

1-2 μl cDNA from RT reaction

2. PCR 擴增循環(huán)參數(shù)

(1)擴增片段<5kb 時采用如下程序

 

環(huán)數(shù)

1st Cycle

9C

1min

 

9C

30s

25-35 Cycles

50~60°C

7C

30s

6kb/min

Last Cycle

7C

2min

(2)擴增片段>5kb 時采用如下程序

環(huán)數(shù)

1st Cycle

9C

1min

 

25-35 Cycles

9C

50~60°C

7C

10s

30s

2-3kb/min

Last Cycle

7C

2min

 

3.  電泳: 1%  瓊脂糖凝膠電泳, 上樣 5 μl,電泳結(jié)束在紫外 燈下檢測條帶。

4.  注意事項: (1) 當(dāng)模板 GC 含量>65%時,請?zhí)砑?/span>

5× Q-Solution (Cat. No.: A3002)。(2)當(dāng)擴增片段<1kb 時, 延伸時間直接使用 15s ,當(dāng)擴增片段>5kb 時,按照      2-3kb/min 的延伸時間進(jìn)行設(shè)置,能獲得更高的產(chǎn)量。(3)  由于不同的 PCR 管其導(dǎo)熱性能有所不同, 通常 PCR   2l 體系可以獲得更高的產(chǎn)量。


 

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