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產品簡介

本品采用雙抗夾心法檢測樣本中 Benzonase 含量。將 Benzonase 特異性抗體預包被在微孔板上，使用時將標準品與待測樣本分別加入到已包被特異性抗體的反應孔內，樣本中的 Benzonase 會與微孔板中的抗體結合，孵育后洗滌以去除微孔板內未結合的物質，加入 Benzonase 檢測抗體（HRP 標記），形成抗體 - 抗原 -HRP 標記抗體的復合物，加入 TMB 進行孵育顯色，顯色程度與 Benzonase 濃度成比例關系，通過測定 Benzonase 標準品的顯色來判斷樣本中 Benzonase 殘留程度。

檢測范圍： 0.094~6 ng/ml

定量限： 0.094 ng/ml

檢測限： 0.019 ng/ml

產品組成：

組分	組分 ( 中文 )	規(guī)格
Benzonase Standard	Benzonase 標準品	1000 ng/ml, 0.8 ml, 1 Vial
Benzonase Detection Antibody (HRP labeled)	Benzaonase 檢測抗體（HRP 標記）	12 ml, 1 Vial
TMB Substrate	TMB 底物	12 ml, 1 Vial
Stop Solution	終止液	12 ml, 1 Vial
Sample Diluent	樣品稀釋液	50 ml, 1 Vial
Wash Buﬀer (20×)	漂洗液	50 ml, 1 Vial
Microtiter Plate (Coated)	預包被酶標板	96 孔 , 1 Plate

所需器材：酶標儀、微孔板恒溫振蕩器、渦旋振蕩器、移液器、封板膜等。

試劑配制

1. 平衡：將所需試劑轉移到室溫（25 ± 3℃) 平衡至少 30 min；確定測定運行的孔數(shù)，取出所需的酶標條，其它放回裝有干燥劑包的鋁箔袋中，然后重新密封并置于 2~8℃保存。

2. 1 × 漂洗液配制：根據本次試驗所需洗板液體積，量取漂洗液（20× )適量，用去離子水按照 1:20 體積比稀釋，混勻后備用。

3. 標準品溶液配制（示例）：

序號	標準液濃度（ng/ml）	標準液體積(μl）	稀釋液體積(μl）	總體積(μl）	終濃度（ng/ml）	剩余體積(μl）
StA	1000	20	180	200	100	170
St8	100	30	470	500	6	250
St7	6.0	250	250	500	3.0	250
St6	3.0	250	250	500	1.5	250
St5	1.5	250	250	500	0.75	250
St4	0.75	250	250	500	0.375	250
St3	0.375	250	250	500	0.188	250
St2	0.188	250	250	500	0.094	250
St1(Blank)	/	/	300	300	0	300

實驗流程

1. 混勻：臨用前將平衡至室溫的試劑輕輕混勻。

2. 加樣：分別加入 100 μl 標準品溶液 (St1~St8) 或待測樣品至相應孔中，加蓋或封板膜封板后在室溫（25 ± 3 ℃)條件下 400~500 rpm 孵育 1 h。

3. 洗滌：甩掉孔內液體，每孔加入至少 1× 漂洗液 350 μl （可用多通道移液器或者洗瓶），再甩去孔內液體后于無塵紙上輕拍至拍干。重復 3 次。（注意：在加入 Benzonase 檢測抗體溶液前勿使板孔長時間過分干燥。洗滌不當可能使復孔間 CV 值偏大，信號偏高或偏低）。

4. 標記：每孔加入 Benzonase 檢測抗體（HRP 標記）溶液 100 μl ，加蓋或封板膜封板后在室溫（25 ± 3℃ )條件下 400~500 rpm 孵育 30 min。

5. 洗滌：甩掉孔內液體，每孔加入至少 1× 漂洗液 350 μl （可用多通道移液器或者洗瓶），再甩去孔內液體后于無塵紙上輕拍至拍干。重復 3 次。（注意：在加入 TMB 底物前勿使板孔長時間過分干燥）

6. 顯色：每孔加入 TMB 底物 100 μl ，室溫（25 ± 3℃)避光顯色 20 min。

7. 終止：每孔加入終止液 100 μl，輕輕敲擊孔板使混勻，終止反應。 8. 測定：加入終止液后 10 min 內，在 450 nm 波長處讀取吸光值。

結果計算

本品建議采用濃度取 10 為底的對數(shù)后采用四參數(shù) Logistic 模型擬合方式進行擬合計算。

標準品濃度（ng/ml）	吸光值
標準品濃度（ng/ml）	測定 1	測定 2	均值
6	1.770	1.778	1.774
3.0	1.088	1.153	1.121
1.5	0.704	0.658	0.681
0.75	0.386	0.417	0.401
0.375	0.241	0.241	0.241
0.188	0.154	0.169	0.161
0.094	0.116	0.122	0.119
0	0.082	0.082	0.082

典型標準曲線圖譜（四參數(shù) Logistic 模型）

產品性能

檢測限：0.019 ng/ml。將 20 個空白對照的平均吸光值加上 2 個標準偏差后代入標曲確定。

定量限： 0.094 ng/ml。確保變異系數(shù) (n=6) 在 20% 以內的最低濃度。

線性：測定不同濃度的標準品溶液，并繪制曲線， R2≥0.98。

重復性：三個已知濃度樣品重復測試 20 次，評估重復性。

中間精密度：三個已知濃度樣品不同時間不同人測試 4 次，評估中間精密度。

名稱	重復性（n=20）			中間精密度（n=4）
名稱	低濃度	中間濃度	高濃度	低濃度	中間濃度	高濃度
均值（ng/ml）	0.28	0.92	4.55	0.28	0.92	4.49
SD	0.035	0.075	0.371	0.037	0.078	0.343
CV（%）	12.4	8.2	8.1	13.1	8.6	7.6

注意事項

1. 本產品僅用于科研，不能用于臨床診斷或治療。

2. 試劑應該按照標簽標明的條件進行儲存，試劑和待測樣本使用前應平衡至室溫。

3. 預包被酶標板使用前，應平衡至室溫后再打開包裝袋取用，剩余的板條應立即放回包裝中重新密封，置于 2~8℃保存。剩余試劑也應重新密封后按標簽標明的條件進行儲存。

4. Benzonase 標準品、 Benzonase 檢測抗體（HRP 標記）溶液應混勻后再使用。

5. 洗滌過程中板孔殘留的液體應在潔凈的無塵紙上拍干，拍干后的板孔不宜長時間過分干燥，否則不恰當?shù)南礈爝^程會造成復孔的 CV 值偏高或者空白（0 ng/ml）吸光值偏高，影響結果準確性。

6. TMB 底物應該是無色透明液體，如果顯示淡藍色，證明該溶液已經被污染，不適合進行后續(xù)分析使用。

7. 樣本處在極端 pH 值（<5.0 或 >8.5），或者含高鹽、高聚糖、高尿素、高有機溶劑和高的去污劑的溶液中，均有可能導致較低回收率。

8. 由于生物樣本基質的復雜性，建議每次試驗加陽性質控試驗樣品，確保試驗的準確性，并采用復孔進行試驗。

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