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R28大鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞

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R28大鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞

培養(yǎng)說明書

一、細(xì)胞培養(yǎng)條件

細(xì)胞名稱

R28大鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞

生長特性

貼壁生長

凍存條件

無血清凍存液

培養(yǎng)體系

DMEM+15 mL sodium bicarbonate+50 mL calf serum +5 mL MEM non-essential amino acids +5 mL L-glutamine + 5 mL Anti-Anti

傳代方法

第一次建議1:2

傳代情況

2天換液

備注

用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基,留作過渡對比培養(yǎng)

如果對比培養(yǎng)效果不好,建議直接購買我們的完全培養(yǎng)基

二、細(xì)胞收貨后處理

A、復(fù)蘇細(xì)胞處理方法:培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞嚴(yán)格無菌將細(xì)胞瓶放置培養(yǎng)箱中靜置2-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。靜置后顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(最好40x,100x,200x各一張),前三天照片重要售后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。

B、凍存細(xì)胞處理方法:收到細(xì)胞后,觀察泡沫箱中干冰是否有剩余,凍存管是否完好無損是否有解凍情況,若發(fā)現(xiàn)干冰完全汽化或凍存管有解凍破損現(xiàn)象,請及時拍照并與我們聯(lián)系。如果細(xì)胞簽收三天內(nèi)未與我們聯(lián)系,則默認(rèn)為收貨良好。復(fù)蘇第一管如有活性問題,請及時聯(lián)系我們,技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第二管,未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

a、細(xì)胞傳代細(xì)胞密度80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)步驟如下:

1) 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次;

2) 加1-2mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置培養(yǎng)箱中消化 1-2min ,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后,加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化;

3) 輕輕吹打細(xì)胞,完全脫落后吸出至離心管中,1000 rpm離心5-8min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL完全培養(yǎng)基后吹勻;

4) 按5-6mL每瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 mL完全培養(yǎng)基的6cm培養(yǎng)皿中或者T25培養(yǎng)瓶中。

(即1個T25瓶傳代接種至2個T25瓶或者2個6cm的培養(yǎng)皿)

b、細(xì)胞凍存:細(xì)胞收集參照傳代步驟,按凍存數(shù)量推薦每支凍存管5×106左右細(xì)胞數(shù)量凍存,加入1ml的我司無血清凍存液(貨號:C7001),輕輕混勻后,放-80℃冰箱,24小時后轉(zhuǎn)入液氮罐中。

C、細(xì)胞復(fù)蘇:從液氮灌或-80℃冰箱中找到需要復(fù)蘇的細(xì)胞,水浴鍋提前打開預(yù)熱37℃。

1) 將凍存細(xì)胞在37℃水浴中迅速搖晃解凍;

2) 將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的離心管中,1000 rpm離心5min;

3) 棄去上清液,補(bǔ)加5mL完全培養(yǎng)基后吹勻,接種于T25培養(yǎng)瓶中(或6cm皿中),培養(yǎng)過夜,第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

四、注意事項:有些細(xì)胞貼壁不牢,在運(yùn)輸過程中細(xì)胞容易脫落,這是正,F(xiàn)象。如脫落較多可將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm離心5-8min,收集上清作過渡培養(yǎng),沉淀加入胰酶1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化1-2分鐘后,加5ml完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心,棄上清,加1-2ml完全培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至5-6ml/瓶,最后放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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