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兔視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞

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  1. 細(xì)胞簡(jiǎn)介:

    兔視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞分離自視神經(jīng)乳頭;視乳頭位于黃斑區(qū)鼻側(cè)附近,境界清楚,呈白色、圓盤狀,因此也稱為視盤。視網(wǎng)膜上視覺纖維在此匯集,并于此穿出眼球向視中樞傳遞。視乳頭中央有一小凹陷區(qū),稱為視杯或生理凹陷。視乳頭是視神經(jīng)纖維聚合組成視神經(jīng)的起始端,它沒有視細(xì)胞,因而沒有視覺,在視野中是生理盲點(diǎn)。視乳頭是開角型青光眼最早受損的部位,星形膠質(zhì)細(xì)胞是視神經(jīng)乳頭處主要的膠質(zhì)細(xì)胞類型,可為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞無(wú)髓鞘的軸突提供結(jié)構(gòu)和生物支持。青光眼視神經(jīng)病變是全球首位不可逆性致肓眼病。青光眼視神經(jīng)病變以視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突喪失并伴有視乳頭處細(xì)胞外基質(zhì)重坦為主要特征。導(dǎo)致視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞喪失的病理生理機(jī)制尚未完全闡明,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)調(diào)控神經(jīng)元微環(huán)境起多重作用,越來(lái)越多的證據(jù)表明膠質(zhì)細(xì)胞町能對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、損傷、修復(fù)及再生起極為關(guān)鍵的作用。視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體多扁平,體積較大,形狀多呈不規(guī)則的多邊形,突起較粗,胞核為橢圓形,核仁清晰可見,核周有較密集物質(zhì),胞質(zhì)稀疏,骨架結(jié)構(gòu)良好,明顯不同于長(zhǎng)梭形的成纖維細(xì)胞形態(tài)。

  2. 方法簡(jiǎn)介:

    實(shí)驗(yàn)室分離的兔視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法、結(jié)合差速貼壁制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

  3. 質(zhì)量檢測(cè):

    實(shí)驗(yàn)室分離的兔視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

  4. 培養(yǎng)信息:

    培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
    產(chǎn)品貨號(hào) P24405
    換液頻率 每2-3天換液一次
    生長(zhǎng)特性 貼壁
    細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
    傳代特性 可傳2-3代
    消化液 0.25%胰蛋白酶
    培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%

    兔視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

    客戶收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

    1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

    2. 貼壁細(xì)胞消化

    1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;

    2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5mL完全培養(yǎng)基終止消化;

    3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);

    4)待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察,用于實(shí)驗(yàn);之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

    3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

    因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因

    沒貼好影響實(shí)驗(yàn);包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。

    四、注意事項(xiàng)

    1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。

    2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。

    3. 消化過程中,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

    4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運(yùn)輸?shù)脑,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

    5. 該細(xì)胞只可用于科研。

    備注:由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考

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