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細胞簡介:
兔神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞分離自腦組織;大腦分左右兩個半球,大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個大腦半球的大部分,它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個半球都有三個面,即外側(cè)面(約占整個皮質(zhì)面積的1/3)、內(nèi)側(cè)面和底面(占2/3的面積);半球表面有很多深淺不等的溝或裂,溝或裂之間的隆起叫回,它們大大增加了大腦的表面積;大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔,使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞,是哺乳動物腦內(nèi)分布最廣泛的一類細胞,也是膠質(zhì)細胞中體積最大的一種。用經(jīng)典的金屬浸鍍技術(shù)(銀染色)顯示此類膠質(zhì)細胞呈星形,從胞體發(fā)出許多長而分支的突起,伸展充填在神經(jīng)細胞的胞體及其突起之間,起支持和分隔神經(jīng)細胞的作用。細胞突起的末端常膨大形成腳板或稱終足,有些腳板貼附在鄰近的毛細血管壁上,因此這些腳板又被稱為血管足或血管周足,靠近腦脊髓表面的腳板則附著在軟膜內(nèi)表面,彼此連接構(gòu)成膠質(zhì)界膜。細胞剛分離時呈圓形,24h后大部分細胞貼壁,均勻分布于瓶底,部分細胞伸出細小突起,培養(yǎng)4-5d后細胞數(shù)量明顯增多,呈扁平、多角形,胞質(zhì)豐富且核漿較少,細胞核呈橢圓形,偏于胞體一側(cè)。神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要細胞組成,不僅具有支持功能,還能夠合成及分泌多種神經(jīng)活性物質(zhì),在維持神經(jīng)元內(nèi)外環(huán)境、生存、遷移、免疫調(diào)節(jié)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、軸突生長及功能整合等方面具有重要作用。
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方法簡介:
實驗室分離的兔神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞采用酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10⁵cells/瓶。
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質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
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培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號 P24436 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態(tài) 梭形、多角形 傳代特性 可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液 0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 兔神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
三、使用方法
人外周血淋巴細胞是一種懸浮細胞,細胞形態(tài)呈圓形,在技術(shù)部標準操作流程下,細胞不增殖;不傳代;建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 懸浮細胞處理
1)收集T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中,用PBS清洗細胞培養(yǎng)瓶1-2次,收集清洗液;
2)1200-1500rpm離心3min,棄上清,收集細胞沉淀;
3)加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞;將分散好的細胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4)若遇到懸浮細胞團塊較大,無法機械吹散時,向步驟2)中細胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中,用吸-管輕輕吹打混勻,37℃溫浴2-3min,消化結(jié)束后,加入胰
酶抑制劑(或血清)終止消化,用吸管輕輕吹打,分散細胞;1200rpm離心5min,棄上清,
收集細胞沉淀;
5)加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打混勻;按傳代比例進行接種傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
6)待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后,培養(yǎng)觀察,用于實驗;之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
四、注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 消化過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運輸?shù)脑,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
5. 該細胞只可用于科研。
特殊注意事項
6. 此細胞為懸浮細胞,請注意不要直接倒掉,造成損失;懸浮細胞因多數(shù)胞體較小,離心收集時,請注意懸液中細胞是否收集完全,可適當加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時間3-5min,增加細胞獲取量。
備注:由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實驗室參考