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細(xì)胞簡介：
豬心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自心臟組織；心臟是脊椎動物身體中最重要的一個器官，主要功能是為血液流動提供壓力，把血液運(yùn)行至身體各個部分。心臟由心肌構(gòu)成，左心房、左心室、右心房、右心室四個腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開，故互不相通，心房與心室之間有瓣膜（房室瓣），這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心臟的作用是推動血液流動，向器官、組織提供充足的血流量，以供應(yīng)氧和各種營養(yǎng)物質(zhì)，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳、無機(jī)鹽、尿素和尿酸等），使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞是組成心臟微血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞，它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在心臟血管疾病的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。近年來大量研究表明，心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能和病理改變直接影響心肌細(xì)胞功能，也是諸多毒素、炎癥因子及病毒等重要靶位，其作為體外研究的細(xì)胞模型在心肌缺血-再灌注發(fā)病機(jī)制和細(xì)胞間旁分泌細(xì)胞生長因子研究中起著重要作用。
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方法簡介：
實(shí)驗(yàn)室分離的豬心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、最后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。
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質(zhì)量檢測：
實(shí)驗(yàn)室分離的豬心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
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培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）或明膠（0.1%） 培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號 P24485 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性 可傳2-3代 消化液 0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 豬心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片
三、使用方法
人外周血淋巴細(xì)胞是一種懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈圓形，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞不增殖；不傳代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 懸浮細(xì)胞處理
1）收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中，用PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液；
2）1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀；
3）加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞；將分散好的細(xì)胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4）若遇到懸浮細(xì)胞團(tuán)塊較大，無法機(jī)械吹散時，向步驟2）中細(xì)胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中，用吸-管輕輕吹打混勻，37℃溫浴2-3min，消化結(jié)束后，加入胰
酶抑制劑(或血清）終止消化，用吸管輕輕吹打，分散細(xì)胞；1200rpm離心5min，棄上清，
收集細(xì)胞沉淀；
5）加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻；按傳代比例進(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
6）待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，培養(yǎng)觀察，用于實(shí)驗(yàn)；之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
四、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 消化過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐�別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
5. 該細(xì)胞只可用于科研。
特殊注意事項(xiàng)
6. 此細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請注意不要直接倒掉，造成損失；懸浮細(xì)胞因多數(shù)胞體較小，離心收集時，請注意懸液中細(xì)胞是否收集完全，可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時間3-5min，增加細(xì)胞獲取量。
備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考
