產(chǎn)品概述
Annexin V-PE／7-AAD熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒用于鑒定凋亡和壞死細(xì)胞。
Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸PS有高度親和力，可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的PS與凋亡早期細(xì)胞胞膜結(jié)合，將Annexin V標(biāo)記熒光染料PE利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡。
7-AAD可與雙鏈DNA特異性結(jié)合，并產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光，正常情況下無法透過細(xì)胞膜。由于凋亡晚期或壞死細(xì)胞膜喪失完整性，7-AAD可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)對DNA進(jìn)行染色，與Annexin V搭配使用，可區(qū)分處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞。本試劑盒檢測喜樹堿誘導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞凋亡效果如下圖所示：
產(chǎn)品使用說明：
本試劑盒中Annexin V Binding Buffer(10×)為10×濃縮液，實(shí)驗(yàn)前用去離子水稀釋成1×工作液。
例如：取1mL Annexin V Binding Buffer(10×)，加入去離子水定容至10mL即可。
實(shí)驗(yàn)操作指南步驟：
1. 細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)，300g離心5min，棄上清，收集細(xì)胞，PBS洗滌一次，輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。
注：本品僅在懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞中驗(yàn)證，良好的細(xì)胞狀態(tài)是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。貼壁生長的細(xì)胞用于凋亡檢測時(shí)，可能會(huì)因?yàn)橐让赶�、吹打等處理�?dǎo)致細(xì)胞的壞死或凋亡，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能存在不可控的影響，請謹(jǐn)慎處理。
2. 取1-5×10^5重懸的細(xì)胞，300g離心5min，棄上清。用PBS洗滌細(xì)胞一次，離心后棄上清，加入500μL稀釋的1×Annexin V Binding Buffer工作液重懸細(xì)胞。
3. 細(xì)胞懸液中加入5μL的Annexin V-PE和5μL的7-AAD染色液。
4. 輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育15-20min。
5. 反應(yīng)完成后立即上機(jī)檢測。如不能及時(shí)檢測，請于冰上避光靜置并于1小時(shí)內(nèi)完成檢測。
保存條件：
Annexin V-PE和7-AAD染色液需要避光保存；7-AAD染色液適當(dāng)分裝后-20℃可保存1年，其他試劑4℃可保存1年。
注意事項(xiàng)：
1. 為獲得最佳的使用效果，請?jiān)?-6個(gè)月內(nèi)使用，Annexin V-PE禁止冷凍保存；
2. 染色后宜盡快檢測，時(shí)間過長可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加；
3. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存；
4. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
(本試劑產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療)
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