HPV假病毒說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:HPV假病毒
【包裝規(guī)格】
15μl /30μl /50μl /100μl/管
【預(yù)期用途】
用于HPV抗血清或者單抗中和抗體滴度體外檢測。
【檢驗原理】
中和抗體在體外與假病毒中和,使得部分假病毒喪失感染細胞的能力,進入細胞的假病毒會表達eGFP、RFP和E2-Crimson等熒光報告基因蛋白。通過Elispot讀板儀掃描并計數(shù)每孔的熒光斑點數(shù),將待測樣品孔的熒光斑點數(shù)與假病毒對照組的熒光斑點數(shù)進行比較,可計算待測樣品的抑制百分比。通過計算公式可以計算出當50%假病毒被抑制時抗體的稀釋倍數(shù),即ID50(Inhibition dilution),用ID50來表示抗體對假病毒的中和活性。ID50值越大,抗體中和活性越高。
【主要組成成分】
HPV假病毒顆粒,L1蛋白,報告基因
【儲存條件及有效期】
-80℃ 密封貯存。有效期:長期。
避免反復(fù)凍融。
生產(chǎn)日期及有效期詳見標簽。
【樣本要求】
樣本為HPV假病毒,需在無菌條件下操作。
【使用方法】
1. 提前預(yù)鋪細胞:中和實驗所用細胞為HEK 293FT細胞(暫無其他推薦的替代細胞),提前2-6小時將HEK 293FT細胞消化,并加入96孔透明平底無菌細胞培養(yǎng)板中。
2. 待測樣品系列稀釋:在96孔無菌細胞培養(yǎng)板中,將待測樣品進行系列稀釋。
3. 病毒稀釋:本產(chǎn)品為假病毒母液,客戶依據(jù)報告中假病毒的滴度進行稀釋使用(1TCID50=1熒光斑點)。
4. 待測樣品與病毒混合孵育:將系列稀釋后的待測樣品與稀釋后的假病毒溶液混合,4℃條件下孵育1小時。
5. 孵育結(jié)束后,將上述混合液與提前預(yù)鋪的細胞進行混合。
6. 將細胞培養(yǎng)板置于37℃、5% CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)60-96小時。
7. 使用ELISPOT熒光斑點計數(shù)儀進行檢測,計算感染抑制率(%)。
感染抑制率(%)=1-(樣本檢測值-細胞對照值)/(病毒對照值-細胞對照值)×100%。
8. 客戶根據(jù)自定標準進行ID50計算(推薦使用Reed-Muench法)。
建議的96孔細胞培養(yǎng)板布局圖
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A | | |
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B | | 細胞對照(僅含有細胞) | 病毒對照(假病毒+細胞) |
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C | |
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H | | |
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【陽性判斷值】
1. 中和實驗過程中必須設(shè)置細胞對照和病毒對照(見上,建議的布局圖)。
2. 中和實驗過程中需要設(shè)置陰性內(nèi)控品及陽性內(nèi)控品(客戶自備)來判斷實驗是否成立。
【產(chǎn)品性能指標】
外觀 外觀應(yīng)滿足如下要求:包裝完整,無破損,文字符號標識清晰。
【注意事項】
1. 本產(chǎn)品僅供中和抗體體外檢測使用。
2. 本產(chǎn)品報告提供假病毒滴度。因細胞水平的中和抗體檢測受細胞類型、細胞培養(yǎng)狀態(tài)、環(huán)境條件等影響較大,客戶需根據(jù)自身實驗室條件確定細胞量、病毒加入量等中和實驗參數(shù)。
3. 減少反復(fù)凍融,少量使用時建議分裝儲存。
4. 流水或者4℃融化使用。
5. 無菌操作。
6. 本產(chǎn)品不能擴增傳代。